Okazaki fragment[오카자키 단편]의 존재 증명
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작성일 22-10-24 01:59본문
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Okazaki 박사는 이를 E.coli 실험으로 증명하였다. culture 1ml에서 0.5~1ml의 DNA가 최종적으로 얻어진다. cell들이 기대한 시간동안 -thymine을 통합하게 한 후에, culture를 부순 얼음과 KCN (0.02 M까지)에 붓는다.
thymine이 불필요한 박테리아나 T4 phage에 감염된 cell을 pulse label하기 위해 -thymine (14 mc/μmole)을 20℃(B. subtilis는 30℃)의 stirred culture(5 X 108 cells/ml)에 넣어 M이 되게 한다. cell suspension은 20℃의 더 많은 양의 stirred medium에 붓는다.
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Okazaki fragment의 존재 증명
DNA replication에서 daughter strand에서 leading strand는 연속으로, lagging strand는 short fragment를 형성하면서 불연속적으로 합성된다 이중 lagging strand에 형성되는 short fragment를 Okazaki fragment라고 한다. -thymine( M)을 첨가시키면 반응은 KCN과 얼음에 의해 멈춘다.
thymine이 불필요한 박테리아나 T4 phage에 감염된 cell을 pulse label하기 위해 -thymine (14 mc/μmole)을 20℃(B. subtilis는 30℃)의 stirred culture(5 X 108 cells/ml)에 넣어 M이 되게 한다.
Thomas procedure에 의한 native DNA 추출: 이것은 몇가지 실험(SDS(sodium dodecyl sulfate)처리는 37℃에서, 그리고 DNA 용액은 collodion membrane을 통한 여과에 의해 모은다)외에는 이전에 설명(explanation)된 것과 같이 수행한다. E. coli 15로는, 회복이 30~60%로 다양하지만 병행된 실험에서 pulse labeled DNA와 uniformly labeled DNA간의 구조적 차이는 발견되…(drop)
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Okazaki fragment의 존재 증명
DNA replication에서 daughter strand에서 leading strand는 연속으로, lagging strand는 short fragment를 형성하면서 불연속적으로 합성된다 이중 lagging strand에 형성되는 short fragment를 Okazaki fragment라고 한다. cell들이 기대한 시간동안 -thymine을 통합하게 한 후에, culture를 부순 얼음과 KCN (0.02 M까지)에 붓는다. E. coli 15를 pulse label하기 위해 thymidine을 함유한 medium에서 키운 cell들을 촉진시키고 thymine을 함유하지 않은 0℃의 소량의 신선한 medium에서 재부유시킨다. 그리고 cell들은 0℃에서 centrifuge하여 모은다. Okazaki 박사는 이를 E.coli 실험으로 증명하였다. 그리고 cell들은 0℃에서 centrifuge하여 모은다.